ів.
Отримання антибіотиків за допомогою мікробіологічного синтезу включає такі основні етапи, як вишукування високопродуктивних штамів продуцентів, підбір поживних середовищ, процес ферментації, виділення і очищення антибіотика.
Біосинтез виконують у спеціальних апаратах - ферментерах - місткістю в кілька десятків тисяч літрів. Ферментацію проводять В«глибинним способом В», який полягає в тому, що зростання цвілі і освіта антибіотика відбуваються по всій товщі ферментаційної маси. Кожен з мікроорганізмів вимагає спеціальних умов ферментації: температури, подачі повітря (аерації), визначеної тривалості процесу. Для забезпечення життєдіяльності мікроорганізму і максимального накопичення антибіотика необхідні спеціальні живильні середовища. Регулюючи якісний і кількісний склад інгредієнтів поживних середовищ, можна істотно впливати на вихід антибіотика. Живильні середовища спочатку подають у посівні апарати (Через установки безперервного стерилізації). Тут відбувається вирощування культур. Потім суміш культури і живильного середовища переміщують у ферментер, де відбувається процес біосинтезу. У ферментер додають також піногасники під уникнути утворення піни при аерації.
Антибіотики виділяють з культуральної рідини осадженням, з допомогою адсорбційної або іонообмінної хроматографії, екстракцією різними органічними розчинниками або при різних значеннях середовища. Очищення антибіотика-сирцю здійснюють хроматографічним методом або противоточной екстракцією з подальшою перекристаллизацией. Виділений кристалічний антибіотик піддають ретельному хімічному і біологічному контролю. Весь процес виробництва антибіотиків здійснюють в строго додержуються асептичних умовах.
4.4 Методи аналізу антибіотиків
Кількісне визначення більшості антибіотиків здійснюють біологічним методом, заснованим на порівняльній оцінці пригнічення росту тест-мікроорганізмів. Активність встановлюють дифузійним або турбидиметричним методами. ГФ XI рекомендує для кількісного визначення метод дифузії в агар, що полягає у порівнянні дії певних концентрацій випробуваного і стандартного зразків антибіотика на тест-мікроорганізм (ГФ XI, в. 2, с. 210).
Це випробування засновано на здатності антибіотиків пригнічувати ріст мікроорганізмів. Визначення проводять методом дифузії в агар на щільною живильному середовищі шляхом порівняння розмірів зон пригнічення росту тест-мікробів випробуваним препаратом і Державним стандартним зразком (ДСО) антибіотика. Активність ДСО встановлюють, як правило, відповідно до Міжнародних біологічними або хімічними стандартами.
Оскільки склад агарового середовища та умови виконання біологічного випробування однакові, величина зони дифузії (в якій розвиток тест-мікроорганізму пригнічується антибіотиком) залежить тільки від хімічної природи антибіотика і його концентрації. Процес інкубації здійснюють у протягом 16-18 год при 36-38 В° С.
Розрахунок біологічної активності виробляють за стандартної кривої, попередньо побудованої на підставі результатів визначення п'яти концентрацій стандартного препарату. Множенням отриманої концентрації (ОД/мл) на ступінь розведення обчислюють активність (вміст ОД) антибіотика в 1 мг препарату. Точність визначень коливається від 5 до 25%. p> Одиниця дії (ОД) являє собою міру, якої виражається біологічна активність антибіотиків. За ОД приймають мінімальне кількість антибіотика, переважної розвиток тест-мікроорганізму в певному обсязі живильного середовища. Кількісне вираження 1 ОД відрізняється у різних антибіотиків. Наприклад, у натрієвої солі бензилпеніциліну 1 ОД відповідає 0,5988 мкг хімічно чистої речовини, а у стрептоміцину підстави, тетрацикліну і його похідних 1 ОД відповідає 1 мкг хімічно чистого речовини.
В останні роки розроблені прискорені біологічні методи визначення антибіотиків у біологічних рідинах.
Для встановлення концентрації антибіотиків аміноглікозидів в крові хворих застосовують більш простий модифікований метод дифузії в агар. Прискорення визначення до 2-6 год замість 16-18 год досягається за рахунок створення максимально сприятливих умов для росту тест-мікроорганізмів (Зменшення шару поживного середовища, оптимізації температури інкубації і т.д.). p> До прискореним мікробіологічними методів відносять методи, засновані на придушенні змін рН живильного середовища в процесі росту тест-мікроорганізмів. Концентрацію визначають порівнянням змін рН в середовищах досліджуваних та стандартних зразків через 1,5 год після початку інкубації. На цьому принципі заснований так званий уреазний метод, що полягає у спостереженні за зміною рН рідкої живильного середовища, що містить 2% сечовини. Вирізняється в процесі росту мікроорганізму аміак викликає зміна рН середовища. Точність визначень близько 46%.
Ферментативний метод заснований на інактивації аміноглікозидів в крові специфічними ферментами (аденілтрансфераза і ацетилтрансфераза), що продуку...
