даткового інформації про специфіку хромосом, тобто визначенню структурних особливостей нормальних і атипових хромосом. В результаті біваріантного проточного аналізу з додатковою забарвленням хромосом авторам вдалося на моделі клітинної лінії людських лімфобластів отримати високий дозвіл метафазних пластин з подальшим вивченням структурної перебудови хромосом і ідентифікацією аномальних.
Проточний біваріантний аналіз, використовуваний для каріотипу хромосом, апробований на досить широкому спектрі клінічного та експериментального матеріалу, включаючи пухлина прямої кишки, культури клітин асцитичної рідини, лімфоцитів периферичної крові і фібробластів людини (VGEnchev, K.G.Tsanev, 1985). p> 4.Наіболее споживані методики, використовувані в цитометрії клітинного циклу.
При проточної цитометрії можна сканувати від 100 до кількох тисяч клітин в секунду, що дозволяє дуже швидко отримати достовірні результати. Проте таким способом можна аналізувати лише дуже розбавлені клітинні суспензії. Солідні тканини необхідно спочатку дезагрегіровать, що завжди супроводжується порушенням морфології. Клітини моношару зазвичай диспергируют обробкою трипсином в присутсвии ЕДТА.
В
Дезагрегація свіжих солідних пухлин
Методи дезагрегации клітин можна поділити на три групи:
- методи, засновані виключно на механічній обробці;
- ферментативні методи;
- методи виділення ядер
Найпростіші і швидкі методи дезагрегации включають тільки механічну обробку тканин. Ці методи особливо гарні для пухких тканин (Наприклад, лімфатичних вузлів) і дозволяє отримувати густі суспензії клітин за кілька хвилин. Для отримання неочищених клітинних суспензій можна використовувати аспірати солідних пухлин, взяті за допомогою шприца.
Ферментативний метод дозволяє отримати досить концентровану клітинну суспензію з різноманітних пухлин, але при великих витратах часу.
Для виділення ядер (зазвичай з тканин, частково дезагрегірованних механічним шляхом) розроблені різні методи, засновані на використанні ферментів, детергентів або тих і інших. Детальна процедура дезагрегации тканин, фарбування препаратів, отримання результатів та їх аналізу для суспензії ядер розроблена Вінделовом та ін (LLVindelov, I.J.Christensen, 1990). p> Мета дезагрегации полягає в отриманні з високим виходом суспензії інтактних ізольованих клітин або ядер, досить добре відповідної вихідного зразка тканини. Вибір способу дезагрегации залежить від типу тканини, розмірів препарату, цілей дослідження, а іноді від швидкості і вартості методу.
суспендированием архівних препаратів, залитих в парафін
Методика дослідження ДНК за допомогою проточної цитометрії суспензії ядер, отриманої з ув'язнених в парафін архівних препаратів, була вперше описана в 1983 р. (DWHedley, MLFriedlander, IWTaylor, 1983). Цю методику можна використовувати в модифікованому вигляді для аналізу самих різноманітних п...
