визначають за калібрувальної кривої.
2.Построеніе калібрувальної кривої: Концентрацію вихідного розчину глюкози встановлюють за методом Бертрана. Для цього беруть три проби по 5 см 3 1%-ного розчину глюкози, додають до кожної пробі по 15 см 3 води і 40 см 3 реактиву Фелінга. Концентрацію вихідного розчину глюкози розраховують як середнє значення з трьох паралельних визначень. Точну концентрацію робочих розчинів глюкози розраховують за даними аналізу вихідного розчину. Сухі конічні колбочки на 100 см 3 заповнюють згідно з табл. 2. br/>В В В В В В
У заповнених колбочка проводять визначення вмісту глюкози колориметричним методом і будують калибровочную криву в координатах В«оптична щільність - кількість глюкози, мг В».
В
Визначення відновлюють цукрів методом Шомадьі - Нельсона (попередник методу Фоліна-Ву)
Колориметричний метод Шомадьі - Нельсона заснований на реакції відновлюють цукрів з реактивом Шомадьі - Нельсона, у результаті якої утворюється забарвлене з'єднання В«молібденових синьВ» загального складу Mo n O 3 n - x блакитного кольору. Інтенсивність забарвлення пропорційна вмісту відновлюють вуглеводів, які визначають за величинами оптичної щільності при 508 нм, по калібрувальної кривої, складеної із застосуванням модельних розчинів. Метод неспеціфічен, трудомісткий.
Реактиви і матеріали: а) Реактив Шомадьі. p> a 24 г карбонату натрію і 12 г тартрату калію - натрію (калій натрій виннокислий середній) поміщають в конічну колбу місткістю 500 см 3 і додають 250 см 3 дистильованої води. Потім доливають 40 см 3 10 % Розчину сульфату міді, перемішують і додають 16 г гідрокарбонату натрію. p> b . 18 г Na 2 SO 4 розчиняють в 500 см 3 гарячої дистильованої води. Розчин кип'ятять протягом 40 хвилин для видалення СО 2 , потім охолоджують.
Cмешівают (a + b) в мірній колбі на 1 дм 3 , доводять до мітки дистильованою водою і перемішують. Протягом перших двох-трьох діб зберігання реактиву Шомадьі осідає невелика кількість міді з домішками. Цей осад фільтрують, готовий розчин зберігають у темній склянці.
б) Реактив Нельсона.
a 25 г модібдата амонію поміщають в мірну колбу на 500 см 3 і розчиняють в 150 см 3 Н 2 О. Розчин перемішують, до нього обережно невеликими порціями додають 21 см 3 концентрованої H 2 SO 4 (х. ч.) при безперервному перемішуванні. p> b 3 г гептагідрату гідроортоарсената натрію (Na 2 HAsO 4 • 7Н 2 О) розчиняють окремо в хімічному стаканчику в 50 см 3 Н 2 Про
(a + b). Виходить прозорий розчин світло-жовтого кольору, його доводять до мітки водою і витримують у термостаті при 37 "С протягом 2 діб. Після витримки розчин готовий до вживання.
Хід роботи.
1.Проведение аналізу: До 1 см 3 випробуваного розчину додають 1 см 3 реактиву Шомадьі, перемішують і витримують на киплячій водяній бані протягом 15 хвилин: br/>
СuSO 4 + 2NaOH [гідролітичний] Вѕ Вѕ В® Cu (OH) 2 + Na 2 SO 4
В
Потім до охолодженої суміші додають 1 см 3 реактиву Нельсона і доводять обсяг до 10 см 3 дистильованою водою:
Na 2 HAsO 4 + 15H 2 SO 4 + 12 (NH 4 ) 2 MoO 4 [в реактиве Нельсона] Вѕ Вѕ В® (NH 4 ) 3 H 4 [As (Mo 2 O 7 ) 6 ] + 21 (NH 4 ) 2 SO 4 + Na 2 SO 4 + 10H 2 O
2 (NH 4 ) 3 H 4 [As (Mo 2 O 7 ) 6 ] + Cu 2 O Вѕ Вѕ В® 4Mo 6 O 17 + 2CuO + (NH 4 ) 2 SO 4 + 2 (NH 4 ) 2 HAsO 4 + 3H 2 O
Оптичну щільність отриманого розчину вимірюють при 590 нм з використанням кювети з шириною грані 5 мм.
2. Побудова калібрувальної кривої. Калібрувальну криву будують після проведення колориметрической реакції модельних розчинів глюкози з концентрацією від 0,02 до 0,14 мг/см 3 . Досліджувана залежність виражається прямою лінією, що виходить з початку координат.
В
Визначення фруктози та інших кетосахаров (по Мак-рері і Слаттер)
В
Визначення грунтується на здатності кетосахаров давати вишневу забарвлення з резорцином в кислому середовищі: ...
