субстанцій, отриманих з використанням технологій В«рекомбінантних ДНКВ». Це, зокрема, відноситься до білка, лікарські препарати якого існують вже більше 20-и років, - людському рекомбінантного інтерферону a-2b. p align="justify"> Найбільш вигідним економічно є використання штамів-продуцентів, в яких рівень біосинтезу цільового білка становить десятки відсотків від сумарних клітинних поліпептидів (у цих випадках, як правило, гетерологічний білок накопичується в бактеріальної клітці у вигляді нерозчинних конгломератів - тілець включення).
Створення подібних бактеріальних штамів-продуцентів можливо тільки при дотриманні ряду умов, один з яких - стабільність мРНК при експресії цільового гена. Основним чинником стабільності мРНК і ефективності її трансляції, є кодоновая композиція гетерологічного рекомбінантного гена. За наявності рідко зустрічаються амінокислотних кодонів, в гені, клонованій у складі мультікопійного експресійної вектора, подібна генетична конструкція буде нежиттєздатна, або ж, рівень синтезу цільового білка буде вкрай низьким. Іншим фактором неефективної експресії гетерологічного гена може бути інтерференція процесу транскрипції гена (особливо, з сильного бактеріального або фагового промотора) з процесом реплікації рекомбінантної плазміди, що можливо навіть за наявності темінатора транскрипції в 3 -кінцевий нетранслі-руемой області цільового гена.
Підвищення вимог до чистоти препаратів на основі рекомбінантних білків, що виділяються з бактеріальних штамів-продуцентів, зажадало розвиток нових біохімічних методів аналізу білків. З'явилися такі аналізи на чистоту, як аналіз ВЕРХ, тести на залишкову ДНК і на залишкові білки штаму-хазяїна і вектора. Тест на пірогенність поступово витісняється тестом на бактеріальні ендотоксини (ЛАЛ-тест). Ускладнення аналітичного контролю призвело до принципових змін технологій виробництва субстанції рекомбінантних білків, тому що застосування старих технологічних шляхів було не задовільним за якістю кінцевого продукту, або ж, економічно невигідним.
При суперсинтезегетерологичных білків в клітинах E. coli (у таких кількостях, що цільовий білок починає утворювати тільця включення), бактеріальні клітини знаходяться в стані стресу. У багатьох випадках бактеріальна культура практично не зростає після індукції синтезу цільового білка. Крім того, в умовах стресу, що накопичуються в тільцях включення білки можуть мати небажані модифікації, починаючи з неотщепленногоN-кінцевого метіоніну, і закінчуючи ацетилюванням або окисленням деяких амінокислотних залишків білка. Подібні модифіковані варіантимогут не відокремлюються від цільового білка при його очищенні за допомогою різних видів гідрофобною та іонообмінної рідинної хроматографії (не кажучи вже про аффинную і гель-фільтраційну), так як при модифікації зміна конформації білка не відбувається, ...
