ато зростає у листках зімової пшениці [16].
ЗРОСТАННЯ актівності розчінної пероксидази спостерігалося за короткочасного 42 ° С теплового стрес у проростках сортів пшениці степового екотипу. Такоже відмічалі Підвищення термостабільності ферменту, пов язане з індукованім синтезом новіх ізоформ ферменту [8].
Підвищення актівності гваякол пероксидази такоже мо свідчіті про наявність вільніх іонів ВМ (Cu, Pb, Zn ТОЩО), Які НЕ могут зв язати з клітіннімі стінкамі чі накопічітісь у вакуолях. Тоб актівність POD может буті індікатором стрес, вікліканого іонамі ВМ та використовуват для передбачення змін стану Рослин організму [16].
Дослідження показують, что 10-денний Вплив 100 ?М концентрації МІДІ віклікає Значне Підвищення актівності гваякол пероксидази у корінного Phaseolus vulgaris [43] та в стеблах проростків кукрудзі [13].
Рослини розвинулася складні адаптівні механізмі для захисту від негативного впліву іонів ВМ. Активну участь в механізмі захисту бере гваякол пероксидаза, механізмі ВІДПОВІДІ Якої на стрес ВМ ми поставили за мету з ясувати у Цій работе.
Розділ 2. Матеріали и методи
.1 Рослинний материал та умови стрес, вікліканого Важка металами
Рослинний материал та умови культівування
Дослідження проводилися на Рослин Nicotiana tabacum Лінії W38.
Для Дослідження роли гваякол пероксидази в умів стрес, вікліканого іонамі МІДІ, кадмію та заліза, вікорістовувалі рослини Nicotiana tabacum Лінії W38, вірощені у грунті за сталої температури + 26 0 С та 16-Годін світлового дня. Полив рослин здійснювалі по мірі вісіхання грунту.
Умови стрес
Для забезпечення Швидкого Проникнення іонів ВМ Рослин 5-6 тижнева віку, что росли на грунті, у воде ГОСТР лезом відокремлювалі надземну Частину від кореневої и місцем зрізу занурювалі у 0,5 х MS, в Яку додавали іоні Cu 2 + або Cd 2 + або Fe 2 + до кінцевої концентрації 0.1, 0.5 та 5 мМ. Контролем слугувалі рослини, Які поміщалі у 0,5 х MS без додавання металів. Стресовості обробка рослин проводили у темряві ПРОТЯГ 2-х та 12-ти годин.
После стрес рослини заморожувалі у рідкому азоті та зберігалі в морозільній камері за температури - 70 0 С для подалі ДОСЛІДЖЕНЬ.
.2 Визначення актівності гваякол пероксидази
Визначення актівності гваякол пероксидази проводили за методом, опис у літературі [12].
Для екстракції білку вікорістовувалі екстракційній буфер, что містів: 50 мМ натрій-фосфатний буфер (рН 7.0), 0.25 мМ ЕДТА, 10% гліцерин, 2.5 мМ аскорбат. До екстракційного буферу додавали рослинний материал, розтертій у рідкому азоті, та центріфугувалі на центріфузі Biofuge pico при 14 000 g ПРОТЯГ 15 хв. После центрифугування відбіралі супернатант та до вімірювання актівності зберігалі на Льода. Облог ресуспендувалі у буфері, что містів: 1 М NaCl, 0.2 М натрій-фосфатний буфер (рН 7.0), дістільовану воду та інкубувалі за температури 30 0 С з постійнім перемішуванням ПРОТЯГ 2-х годин. После цього центріфугувалі на центріфузі Biofuge pico при 14 000 g ПРОТЯГ 15 хв и вікорістовувалі супернатант для подалі ДОСЛІДЖЕНЬ.
Загальну актівність гваякол пероксидази вімірювалі спек...
