икористовують еритроцитарний антиген і контрольні (позитивна і негативна) сироватки з діагностичного набору БелНІІЕВ для діагностики інфекційного бурситу (хвороби Гамборо).
Реакцію ставлять мікрометодом в мікротитратор Такач. У лунках горизонтальних рядів плексигласові платівок з досліджуваних платівок готують послідовні дворазові розведення (від 1:2 до 1:1024) на 0,85% - ном розчині натрію хлориду, що містить 1% гліцерину, в обсязі 0,025 мл (1 крапля). У перші лунки вносять 0,025 мл досліджуваної сироватки, перемішують, і 0,025 мл суміші переносять у наступні лунки і т.д. З останніх лунок після перемішування 0,025 мл вмісту видаляють у дезінфікуючий розчин. У кожну лунку з відповідним розведенням сироватки додають 0,025 мл 1%-ної суспензії сенсибілізованих вірусом еритроцитів і струшують. p> Одночасно готують: контроль еритроцитарного антигену на спонтанну аглютинацію (в 2-3 лунках вносять 0,025 мл негативної сироватки і 0,025 мл еритроцитарного антигену); позитивний контроль (у 2-3 лунках вносять 0,025 мл позитивної сироватки і 0,025 мл еритроцитарного антигену); негативний контроль (у 2-3 лунки вносять 0,025 мл негативної сироватки і 0,025 мл еритроцитарного антигену).
плексигласові платівки з компонентами поміщають у термостат на 1 - 1,5 години при t = 37 В° С до осідання еритроцитів.
Облік реакції ведуть тільки в тому випадку, коли контроль еритроцитарного антигену на спонтанну аглютинацію і зі свідомо негативною сироваткою негативні, а контроль з позитивною сироваткою - позитивний. p> Позитивна реакція характеризується появою осаду еритроцитів у вигляді парасольки на дні лунки. Негативна реакція проявляється випаданням еритроцитів в осад у вигляді крапки або колечка з рівними краями. p> При аглютинації еритроцитів піддослідними сироватками в розведенні 1:8 і вище РНГА вважають позитивною, а 1:4 і нижче - негативною.
Імуноферментний аналіз широко застосовують як найбільш специфічного тесту для виявлення в сироватці крові імунної птиці специфічних противірусних антитіл. Для постановки цієї реакції використовують набір діагностикумів ВНИИЗЖ для визначення антитіл до вірусу інфекційної бурсальной хвороби (хвороби Гамборо) методом ІФА. Сутність даної методики полягає у виявленні комплексу антиген-антитіло на поверхні лунок полістиролових планшета. Утворився специфічний комплекс взаємодіє з антивидові імунопероксидазному кон'югатом проти Ig G курей і викликає розкладання субстрату, фарбуючи вміст лунок планшета. p> Перед приготуванням робочих розчинів набір з компонентами витримують 30 хв. при кімнатній температурі (18-20 В° С).
Розчин № 1. У 1000 см3 дистильованої води розчиняють 0,97 г трис (оксиметил) амінометана (флакон 5.1), 6,61 г трис (оксиметил) амінометана гідрохлориду (флакон 5.2) і 11,7 г хлориду натрію (флакон 5.3). Після вимірювання рН отриманого розчину (яке повинно бути в межах 7,4-7,6), до нього додають 1,0 мл рідкого детергенту твін-20 (флакон 7). Даний розчи...
