ого спирту за п'ятибальною шкалою: 1 - відсутність помутніння, 2 - слабке, 3 - помірне, 4 - сильне, 5 - дуже сильне.
рНСтепень каламутності розчину казеінадо додавання спіртапосле додавання спірта3, 43,84,44,75,15,7
У висновку відзначити ВЕТ казеїну і можливість її практичного використання для виділення цього білка.
Практичне значення роботи. Знаходження ізоелектричної точки для індивідуальних білків дозволяє підібрати умови для осадження їх з біологічних екстрактів, що містять суміш різних білків, і при очищенні білкових препаратів у фармації. p align="justify"> Робота 6. Дослідження денатурації білків
Речовини, що порушують структурну організацію білкової молекули (тобто четвертичную, третинну і навіть вторинну структури), призводять до зміни фізико-хімічних і біологічних властивостей білка. Це явище називається денатурацією. p align="justify"> денатуруються чинники діляться на хімічні, фізичні та біологічні. Найбільш обширні групи хімічних факторів (кислоти, важкі метали, алкалоїди, поверхнево-активні речовини і т.д.) і фізичних факторів (температура, іонізуюча радіація, ультразвук і т.д.). Біологічну денатурацію можуть викликати протеолітичні ферменти (наприклад, трипсин), які руйнують вищі рівні організації молекули білка перед тим, як гідролізувати її пептидні зв'язку. p align="justify"> Денатурація змінює фізико-хімічні властивості білка, зокрема, його розчинність. При цьому білок стає менш гідрофільним і легко осідає. Денатурація найчастіше незворотна, але в ряді випадків видалення денатуруючих агентів призводить до відновлення вихідної конформації молекули білка і його природних властивостей - ренатурація. p align="justify"> Реактиви. Азотна кислота, конц.; Сульфат міді, 5%-ний розчин; сульфат свинцю, 5%-ний розчин; трихлороцтової кислота, 10%-ний розчин; хлорне кислота, 10%-ний розчин; етиловий спирт, 96%-ний; ацетон.
Обладнання. Штатив з простими пробірками; піпетки; водяна баня. p align="justify"> Матеріал. Розчин яєчного білка (приготування див. роботу 1). p align="justify"> а. Денатурація білка концентрованими мінеральними кислотами. Метод заснований на здатності мінеральних кислот викликати нейтралізацію зарядів і руйнування просторової структури білка, що приводить до його денатурації і осадження. p align="justify"> Хід визначення. У пробірку наливають 10 крапель концентрованої азотної кислоти і обережно, тримаючи пробірку під кутом 45?, Нашаровують на кислоту 5 крапель розчину яєчного білка. Відзначити зміни на кордоні двох шарів рідин (кільце денатурованого білка). p align="justify"> б. Денатурація білка органічними кислотами. Метод заснований на здатності органічних кислот нейтралізувати заряд молекули білка і руйнувати її просторову структуру, що призводить до денатурації і осадження білка. p align="justify"> Хід визначення. У дві пробірки наливають по 10 крапель розчину яєчного білка. Додають в одну з них 2 краплі трихлороцтової кислоти, а в другу - 2 краплі хлорної кислоти, відзначають, що відбулися. p align="justify"> в. Денатурація білка солями важких металів. Метод заснований на зв'язуванні іонів важких металів з функціональними групами бічних радикалів амінокислот у молекулу білка, в результаті чого руйнується її просторова структура і відбувається осадження денатурованого білка. При додаванні надлишку солей важкий их металів (крім AgNO3 і HgCl2) відбувається розчинення спочатку утворюється осаду через адсорбції іона металу і придбанні внаслідок цього білкової молекулою позитивного заряду.
Хід визначення. У дві пробірки вносять по 10 крапель розчину яєчного білка. У першу з них додають 1-2 краплі розчину сульфату міді, а в другу - 1-2 краплі розчину ацетат свинцю. Спостерігають за випаданням осаду білка. Додають в кожну з пробірок по кілька крапель відповідного осадителя і спостерігають за розчиненням осаду. p align="justify"> р. Денатурація білка органічними розчинниками. Метод заснований на здатності органічних розчинників (спирт, хлороформ) порушувати гідрофобні взаємодії всередині білкової молекули і викликати її денатурацію, що призводить до зниження розчинності і випадання денатурованого білка. p align="justify"> Хід визначення. У три пробірки наливають по 10 крапель розчину білка і додають рівні об'єми органічних розчинників: в першу - етиловий спирт, в другу - ацетон, в третю - хлороформ. Спостерігають за випаданням білка. p align="justify"> Оформлення роботи. Особливості дії денатуруючих речовин вказати в протоколах по кожній реакції осадження. У висновках відзначити причину денатурації білка. p align="justify"> Практичне значення роботи. Явище денатурації білків використовується в клініці, фармації і біохімічних дослідженнях:
а) для осадження білка в досліджуваному біологічному матеріалі з метою подальшого визначення в ньому низькомолекулярних ...
