досить складно. Зазвичай для цього використовують непрямі методи, такі як визначення фіксації 14 СО2 або [ 3 Н]-тимідину. Крім того, проводять прямий підрахунок числа клітин з використанням флуоресцентного мікроскопа, фарбуючи клітини флуоресцентними барвниками (наприклад, 4 ',6-діамідинів-2-феніліндолом, ДАФИ) або обробляючи їх флуоресцентними ДНК-зондами. br/>
4.0. Методи зберігання культур забезпечують
тривалий підтримання їх життєздатності
Основні цілі зберігання культур - це підтримання життєздатності клітин і чистоти культури, а також запобігання змін і мутацій, тобто збереження мікроорганізму в максимально близькому до вихідного штаму стані. Для зберігання важливий правильний вибір середовища і методу культивування, а також віку культури на момент початку зберігання.
Методи нетривалого зберігання лише частково задовольняють цим критеріям. З таких методів найчастіше застосовується періодичний пересівання культур на свіжу середу з вирощуванням при низькій температурі і наступним зберіганням в холодильнику. Культури спорових бактерій, містять зрілі суперечки, можна зберігати сухими у стерильній грунті, на стерильній фільтрувальної папері або у вигляді культур, висушених за допомогою силікагелю. Деякі бактерії добре переносять зберігання в висушених краплях желатину. Для багатьох цілей зберігають клітини в життєздатному стані протягом років при температурі -20 В° С або, що краще, при -70 В° С (глибоке заморожування). Для зберігання за допомогою цих методів необхідно використовувати культури в середині або в кінці експоненційної фази росту, сконцентровані і потім ресуспендований в невеликій кількості свіжої живильного середовища. При заморожуванні в середовищі повинні бути присутніми кріопротектори, такі як гліцерин (15-40 об.%) Або диметилсульфоксид (ДМСО, 5-10 об.%), Що оберігають клітини від пошкодження заморожуванням, яке має відбуватися зі швидкістю 1 В° С/хв. Відтавання заморожених культур рекомендується проводити в більш швидкому режимі.
В даний час широко застосовуються методи тривалого зберігання, засновані на ліофілізації або ультразаморажіваніі культур в рідкому азоті (-196 В° С) або над рідким азотом (-150 В° С). Для оцінки ефективності цих методів їх порівнюють за часткою вижили клітин після певного часу зберігання. Очікуваний період виживання бактерій при обох способах тривалого зберігання перевищує 40 років, в той час як при глибокому заморожуванні він становить 1-3 роки. При ультра-заморожуванні до суспензії зазвичай додають кріопротектори, такі як гліцерин (10 об.%) або ДМСО (5 об. %). Ці сполуки водорозчинні і здатні легко проходити через клітинну мембрану, мають низьку точку плавлення і можуть заміщати воду в якості гідратної оболонки, зменшуючи таким чином шкідливу вплив дегідратації при замерзанні води. Тому заморожування і утворення кристалів льоду в середовищі...
