г дрібно порубаного свіжого м'яса без кісток, жиру і сухожиллі заливають в емальованій каструлі 1 л водопровідної води, нагрітої до 50 ° С, і залишають настоюватися 12 год при кімнатній температурі або 1 год при 50-55 ° С.
М'ясо віджимають, екстракт проціджують через марлю із шаром вати, кип'ятять протягом 30 хв для згортання колоїдних білків і фільтрують двічі (перший раз через марлю з ватою, другий - через паперовий фільтр). Фільтр доливають водою до 1 л, розливають у колби, закривають ватяними пробками і стерилізують при 120 ° С 20 хв (пробки колб закривають зверху ковпачками з паперу). Ватні пробки повинні бути щільними, так як вони є фільтром, що перешкоджає проникненню бактерій з повітря після стерилізації. М'ясний бульйон може бути використаний в будь-який час для приготування відповідних середовищ. Якщо їх готують відразу, то попередня стерилізація зайва. Нерідко в лабораторних умовах м'ясної настій кип'ятять разом з м'ясом, а потім м'ясо віджимають. Бульйон виходить хорошої якості. Якщо бажано мати м'ясний бульйон особливо високої поживності, під час настоювання м'яса з водою додають трохи пепсину і підкисляють бульйон соляною кислотою.
Пепсин додатково гідролізує білкові сполуки м'яса, і кількість засвоюваних бактеріями поживних речовин зростає. М'ясо можна замінити м'ясним екстрактом, беручи його по 5 г на 1 л середовища. Для приготування мясопептонного бульйону до 1 л м'ясного бульйону додають 5-10 г пептона (пептон - перший продукт гідролізу білка з високою молекулярною масою) для підвищення калорійності середовища та 5 г кухонної солі з метою створення осмотичної активності. Середу нагрівають до розчинення пептона, постійно помішуючи. Потім встановлюють нейтральну або слаболужну реакцію середовища, доливаючи 20% -ний розчин Na 2 CO 3 (до посиніння вологою червоною лакмусового папірця; при цьому фенолфталеїн ще не показує лужну реакцію - при додаванні його до середовища у фарфоровій чашці рожеве забарвлення не виявляється). Зручно використовувати індикатор бромтимолблау. 1-2 краплі його вносять скляною паличкою у фарфорову чашку і додають краплю бульйону.
У нейтральному середовищі бромтимолблау темно-зелений, у кислому - жовтий, в лужному - синій. Після встановлення реакції середу знову кип'ятять 5-10 хв і білки, коагульовані від зміни реакції, відфільтровують через паперовий фільтр без освітлення бульйону або освітливши його білком. Прозорий М'ясо-пептони бульйон розливають у пробірки, закривають ватяними пробками і стерилізують при 120 ° С протягом 20 хв. М'ясо-пептони агар (МПА). До 1 л м'ясо-пептонного бульйону додають 15-20 г дрібно нарізаного агар-агару.
Середу нагрівають до розчинення агару (температура плавлення його 100 ° С, застигання - 40 ° С), встановлюють слаболужну реакцію середовища 20% -ним розчином Na 2 CO 3 і через воронки розливають у пробірки (але 10 мл для разлівок в чашки - агар стовпчиком і по 5 мл для отримання скошеного, похилого агару). При розливі агару необхідно стежити потім, щоб краї пробірки були сухими, інакше пробки прилипають до скла. Пробірки із середовищем стерилізують в автоклаві при 120 ° С протягом 20 хв. М'ясо-пептонна желатину (МПЖ). В 1 л мясопептонного бульйону завадять 100-150 г желатини. Температура плавлення залежить від процентного вмісту в середовищі. 10% -ва желатину плавиться при 24 ° С, 15% -пая - при 25 °. У літній час середовища готують, додаючи 15% желатини. Після розчинення желатини при обережному нагріванні в середовищі встановлюють слаболужну реакцію (як і для МПБ і МПА), кип'ятять протягом 5хв, потім охолоджують -до 40-50 ° С. Одночасно яєчний білок збивають з невеликою кількістю води, вливають його в охолоджену желатинову середу, добре збовтують і знову нагрівають. Середа після випадання білків стає прозорою. Її фільтрують через гарячу воронку, розливають у пробірки і стерилізують в кип'ятильник Коха текучим пором, прогріваючи середу за 30 хв через 24 год 3 рази.
Картопляний агар. 200 г очищеного і промитого водою картоплі нарізують скибочками, заливають 1 л водопровідної води, варять 30 хв. Відвар фільтрують через вату і доводять до початкового об'єму. До отриманої рідини додають 2% агару, кип'ятять до його розчинення і встановлюють нейтральну реакцію середовища (рп 7,0). Середовище стерилізують при 1 атм протягом 20 хв. Пивне сусло. Зерна ячменю замочують у холодній воді і пророщують при 35 ° С. Після того як паростки будуть удвічі більше довжини зерна, останнє висушують до повітряно-сухого стану (можна при слабкому підігріванні) і одержують солод. Для приготування сусла солод крупно розмелюють і 250 г його беруть на 1 л води. Суміш підігрівають при 57 ° С (для кращого виділення ферменту амілази) до зникнення реакції на крохмаль (синє забарвлення з йодом).
Проби на оцукрювання крохмалю проводять у порцеляновій чашці у краплі рідини. Су...
