начення. Беруть три пробірки: в першу вносять 1 мл води, в другу - 1 мл розчину соляної кислоти, в третю - 1 мл розведеної слини. Додають в усі проби по 5 мл розчину крохмалю, перемішують їх скляною паличкою і ставлять першу і третю пробірки у водяну баню при 38 Вє С, а другу - в киплячу водяну баню. Через 15 хв пробірки охолоджують. З кожної пробірки відбирають по 5 крапель в інші пробірки, додають по 1-2 краплі розчину йоду і порівнюють фарбування проб. p align="justify"> Для визначення мальтози відбирають по 3 мл з кожної пробірки, додають по 1 мл реактиву Фелінга і нагрівають верхній шар суміші до кипіння. Відзначають появу в пробах червоного осаду оксиду міді (I). p align="justify"> Оформлення роботи. Результати заносять в таблицю. br/>
КаталізаторСубстрат реакцііПродукт реакцииВыявлениеРезультатсубстратовпродуктов
У висновках вказати різницю у дії каталізаторів на швидкість гідролізу крохмалю.
2. Виявлення ферментів, що відносяться до різних класів
Всі ферменти в залежності від типу каталізуються хімічних реакцій діляться на шість класів: оксидоредуктази, трансферази, гідролази, ліази, ізомерази, лігази (синтетази). Усередині кожного класу ферменти підрозділяються на підкласи, подподкласси, які уточнюють природу ферментативної реакції (номенклатуру і систему нумерації ферментів см. підручник, с.125-129). p align="justify"> Для виявлення ферментів кожного класу в біологічному матеріалі є свої особливості, тому необхідно визначити умови для протікання ферментативної реакції. Якісні реакції на ферменти використовуються в клініці для виявлення ферментів у мазках крові, біоптатах і мікропрепаратах при ензімоцітохіміческіх дослідженнях, а також у гігієнічної практиці при постановці проб на присутність ферментів в продуктах харчування (молоко, картоплю і т.д.). При поділі ферментів методом електрофорезу їх ідентифікацію також виробляють за допомогою якісних реакцій. br/>
Робота 20. Виявлення оксидоредуктаз в біологічному матеріалі
У реакціях, що каталізуються Оксидоредуктази, окислюється субстрат розглядається як донор водню або електронів, а акцептором можуть бути природні речовини (коферменти - НАД, НАДФ, ФМН, ФАД, КоQ, кисень, органічні сполуки, цитохроми та ін .) і ксенобіотики.
Для більшості ферментів цього класу рекомендуються назви: дегідрогенази і редуктази. У тих випадках, коли акцептором служить О2, використовується термін оксидаза, а якщо кисень в ході реакції включається до складу субстрату, то фермент називається оксигеназ. Пероксидаза є ферментом, що використовують Н2О2 в якості акцептора, а каталаза - ферментом, що каталізує реакції, де донорно-акцепторні пару складають дві молекули Н2О2. p align="justify"> Реактиви. Формальдегід, 0,4%-ний розчин; метиленовий синій, 0,01%-ний розчин. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; водяна баня; лабораторний термометр; піпетки місткістю 1 і 5 мл. p align="justify"> Матеріал.
Картопляний сік (сира картопля натирають на тертці і віджимають через два шари марлі).
Свіже коров'яче молоко.
а. Виявлення альдегідоксидази (альдегід: кисень оксіредуктази; КФ 1.2.3.1) в молоці. p align="justify"> Метод заснований на візуальному спостереженні за знебарвленням метиленового синього (МС), що зв'язує водень, який відщеплюється за участю альдегідоксидази від субстрату.
альдегідоксидазою каталізує реакцію дегідрування різних альдегідів, наприклад, формальдегіду.
Водень переноситься на ФАД +, що є коферментом даного ферменту, а потім на кінцевий акцептор - кисень - за рівнянням
альдегідоксидазою
НС? О + Н2О + ФАД + Н? С? О + ФАД? Н2
? ? p align="justify"> М ВІН
альдегідоксидазою
ФАД? Н2 + О2 ФАД + + Н2О2
При додаванні МС - штучного акцептора водню - в безкисневих умовах утворюється його відновлена ​​форма (лейкоформа) МС? Н2.
Якщо безбарвний розчин метиленового синього струснути, то він знову придбає синє забарвлення:
МС? Н2 + О2? МС + Н2О2
Хід визначення. У дві пробірки вносять по 5 мл свіжого молока і додають у першу 1 мл води, а в другу такий же об'єм розчину формальдегіду. В обидві проби доливають по 1 мл розчину метиленового синього, вміст перемішують і доливають 3-4 краплі вазелінового масла (для оберігання рідкої суміші від контакту з киснем повітря). p align="justify"> Пробірки ставлять у водяну баню, нагріту до 37? С. Через 5-10 хв порівнюють зміна фарбування в пробах. Сильно струснувши, знову відзначають перехід ...
