в попередній очищенню, так як гідрофільні компоненти миттєво викликаються з колонки. Градієнтне елюювання проводять, змінюючи концентрацію протівоіона в рухомий фазі або міняючи полярність розчинника. При зміні концентрації протівоіона, який залишається в нерухомій фазі, змінюється сила розчинника, а при зміні рН рухомої фази змінюється селективність поділу.
Від звичайної звернення-фазною хроматографії легко перейти до іон-парної на зверненої фазі, і навпаки.
Іон-парне поділ на зверненої фазі (табл. 3.5) може бути проведено кількома методами:
1) на прищепленої до матриці нерухомій фазі, що складається з вуглеводнів;
2) те ж саме, але в якості протівоіона використовують ПАР;
3) на нерухомій фазі, що складається з механічно утримуваної органічної рідини;
4) на нерухомій фазі, яка містить рідкий ионообменник.
Важливою умовою проведення іон-парної хроматографії є ​​стабільність системи. Це означає у випадку механічно утримуваної рідини несмешиваемость водної та органічної фаз, що досягається чітким термо-статірованіем і попередніми насиченням рухомої фази нерухомою. При роботі з нормальною фазою при введенні протівоіона в нерухому фазу необхідно запобігти його винесення нерухомої фазою за рахунок утворення іонних пар, які покидають болонку. Протиіон в цьому випадку додають в зразок до введення його в хроматограф або в рухому фазу. Оскільки в іон-парної хроматографії працюють з полярними речовинами, схильними до утворення хвостів, слід пам'ятати, що в цьому випадку бажано застосувати іншу рухому або нерухому фазу, інший протиіон. Необхідно, щоб у іон-парної хроматографії при зміні концентрації не змінювався значення k 'зразка, що може спричинити утворення хвостів. Водна фаза повинна мати постійну концентрацію лротівоіона і рН. Зазвичай використовують цитратний або фосфатовий буферний розчин. Іноді протиіон сам є буфером. У разі поділу при низьких рН розчини сильних кислот забезпечують достатню буферну дію.
Цікаво простежити роль протівоіона в іон-парної звернення-фазною хроматографії. Можна написати наступні рівняння для зразка, що має аніон і
k '= (Vs/Vm) E (c + ), k '= (Vs/Vm) E (c-),
де Е-константа екстракції конкретної іон-парної системи; (з +) і (с-) - концентрації аніонного та катіонного протівоіона.
При інших незмінних умовах Е постійна і, отже, підвищення концентрації протівоіона в рухомій фазі призводить до збільшення k 'при поділі на зверненої фазі. У нормально-фазної іон-парної хроматографії k 'також змінюється за рахунок зміни концентрації протівоіона в рухомій фазі. Значення k 'може регулюватися типом протівоіона, наприклад, заміна гептансульфокіслоти пентансуль-фокіслотой може змінити k 'в 2-5 разів. Цей ефект яскраво виражений при низьких концентраціях протівоіона. Великі молекули протівоіона дають великі величини k 'при іон-парному поділі на звичайній фа...
