вітаміни, використовується при розробці кількісного визначення їх у різних природних об'єктах і ліках. br/>
Робота 78. Визначення вмісту тіаміну і рибофлавіну флуориметричним методом у полівітамінних препаратах
Реактиви. Соляна кислота, 0,1 М розчин; окислювальна суміш *; Н-бутанол, етанол, 96%-ний; тіамін, стандартний розчин концентрації 10 мкг/мл; оцтова кислота, крижана; перманганат калію, 4%-ний розчин; гідроксид водню , 3%-ний розчин; гідросульфіт натрію, порошок; рибофлавін, стандартний розчин концентрації 0,005 мг/мл.
Обладнання. Штатив із пробірками; Пеніцилінові флакончики з поліетиленовими пробками; піпетки місткістю 1 і 5 мл; мірний циліндр місткістю 50 мл; ступка з товкачиком; флуориметр ЕФ-3 або біан. p align="justify"> Матеріал. Драже полівітамінів. p align="justify"> а. Визначення вмісту тіаміну. Метод заснований на здатності тіаміну окислюватися Гексаціаноферрат (III) калію в лужному середовищі в тіохром, який після вилучення його з розчину бутиловим спиртом дає в ультрафіолетовому світлі синьо-блакитну флуоресценцію:
В
Хід визначення. Драже полівітамінів розминають в ступці, додаючи 30 мл розчину соляної кислоти, і ретельно перемішують. p> В один флакончик (контроль) вносять 5 мл соляної кислоти, в другій (досвід) - 1 мл водного екстракту драже вітамінів і 4 мл дистильованої води, в третю (стандарт) - 5 мл розчину тіаміну. ​​
У всі флакончики доливають по 1,5 мл окисної суміші і обережно струшують їх до повного перемішування. Потім додають в них по 5 мл бутанолу, щільно закривають пробками і інтенсивно струшують 5 хв. Після розшарування рідини обережно додають по 0,5 мл етанолу (для прояснення бутанолу). p align="justify"> Обережно зливають просвітлений бутанольного шар в кювету флуориметра і вимірюють інтенсивність флуоресценції дослідної та контрольної проб із стандартним розчином тіаміну. ​​
Розрахунок проводять за формулою
(Еоп - Ек) 0,01 В· 1.5, 5
х = ----------,
Ест30
де х - вміст тіаміну в драже, мг;
Еоп - свідчення флуориметра для дослідної проби;
Ек - свідчення флуориметра для контрольної проби;
Їсть - свідчення флуориметра для стандартної проби;
, 01 - концентрація тіаміну в стандартному розчині, мг/мл;
- обсяг екстракту драже, мл;
- обсяг екстракту, взятого на дослідження, мл;
, 5 - обсяг проби, просвітленої етанолом, мл.
б. Визначення вмісту рибофлавіну. Принцип методу див. роботу 73, тобто
Хід визначення. Драже полівітамінів розминають в ступці, додаючи 30 мл розчину соляної кислоти, і ретельно перемішують. p align="justify"> В одну пробірку вносять 7 мл дистильованої води, в другу (дослідну) - 2 мл екстракту драже та 5 мл дистильованої води, в третю (стандартна) - 1 мл стандартного розчину рибофлавіну і 6 мл води.
У всі пробірки доливають по 10 крапель крижаної оцтової кислоти і по 1,5 мл розчину перманганату калію (для окислення сторонніх флуоресціюючих речовин).
Вміст пробірок струшують і додають по краплях (приблизно 5 крапель) гідроксид водню при постійному помішуванні скляною паличкою до повного просвітлення рідини. Розчини відстоюють 5 хв, до припинення виділення бульбашок газу. Зливають рідину в кювети флуориметра і вимірюють інтенсивність флуоресценції всіх проб. p align="justify"> Розрахунок проводять за формулою
(Еоп - Ек) 2.0, 005.7
х = ----------,
Ест30
де х - вміст рибофлавіну в драже, міліграм;
Еоп - свідчення флуориметра для дослідної проби;
Ек - свідчення флуориметра для контрольної проби;
Їсть - свідчення флуориметра для стандартної проби;
- обсяг екстракту драже, мл;
- обсяг екстракту драже, взятого на дослідження, мл;
, 005 - концентрація рибофлавіну в стандартному розчині, мг/мл;
- обсяг флуоріметріруемих проб, мл.
Оформлення роботи. Розрахувати вміст досліджуваних вітамінів у драже і зробити висновок про можливість практичного використання флуоріметріческого методу. p align="justify"> Практичне значення роботи. Флуоріметріческійметод визначення тіаміну і рибофлавіну застосовуються для визначення цих вітамінів у харчових продуктах, лікарських рослинах і готових лікарських препаратах, а також для вивчення забезпеченості ними організму. Забезпеченість цими вітамінами може бути визначена за їх рівнем у крові і по екск...
