ляться на дві групи: прості, або протеїни, і складні, або протеїди. Протеїни складаються тільки з амінокислот, пов'язаних в поліпептидний ланцюг пептидними зв'язками, а протеіди містять крім амінокислот небілковий компонент, або простетичної групу (вуглевод, ліпід, нуклеїнову кислоту, кофактор і т.д.). Білки мають кілька рівнів структурної організації: первинний, вторинний, третинний і в більшості випадків четвертинний. br/>
1. Хімічна природа простих білків
Присутність речовин білкової природи в біологічному матеріалі і лікарських препаратах можна виявити за допомогою якісних реакцій на структурні компоненти білка і його функціональні групи. Всі відомі реакції виявлення білків і пептидів можна розділити на три типи. ol>
Реакція на пептидную групу, характерну для поліпетідной ланцюга і нетипову для інших біологічних речовин. Вона специфічна для білків і пептидів.
Реакції на кінцеві ? - аміно-або ? - карбоксильні групи. Ці реакції дають також вільні ? - амінокислоти і деякі інші сполуки.
Реакції на окремі бічні радикали або групи амінокислот, що входять до поліпептиди. Ці реакції специфічні також і для вільних ? - амінокислот і інших речовин, що містять відповідну функціональну групу в молекулі.
Робота 1. Якісні (кольорові) реакції на функціональні групи білків та амінокислот
Реактиви. Біуретового реактив * (містить NaOH і іони Cu2 +), нингидрин, 0,5%-ний водний розчин; азотна кислота, конц.; Гідроксид натрію, 20%-ний розчин; реактив Миллона *; оцтова кислота, крижана; сірчана кислота, конц .; ацетат свинцю, 5%-ний розчин; нітропрусид натрію, 5%-ний розчин.
Обладнання. Штатив з простими пробірками; крапельниці; піпетки місткістю 1 мл; водяна баня. p align="justify"> Матеріали для дослідження.
Розчин яєчного білка (білок одного курячого яйця відокремлюють від жовтка, розчиняють у 20-кратному обсязі дистильованої води, фільтрують через кілька шарів марлі і зберігають у холодильнику).
Нерозбавлений свіжий яєчний білок.
1%-ні розчини гліцину, гліцілгліціна, ? - аланіну, ? - аланіну.
0,1%-і розчини фенілаланіну, тирозину, триптофану, гістидину, цистеїну гідрохлориду, метіоніну.
а. Биуретовая реакція на пептидную групу (реакція Піотровського). Метод заснований на здатності пептидного групи білків і поліпептидів утворювати в лужному середовищі з іонами Cu2 + комплексне з'єднання фіолетового кольору з червоним або синім відтінком залежно від числа пептидних зв'язків в білку. p align="justify"> Біуретова реакція позитивна з білками і пептидами, що мають не менше двох пептидних зв'язків (? С? NH?). З ди-і трипептиди вона нестійка. br/>
?
Про
біуретового реакцію дають небілкові речовини, що містять не менше двох пептидних груп, наприклад, похідне сечовини - біурет
N? C? NH? C? NH2
дав назву цієї реакції, і деякі
? ? Про
інші. У сильнощелочной середовищі пептидні групи поліпептидів переходять у енольну форму, в якій і взаємодіють з іоном Cu2 +, створюючи пофарбований біуретового комплекс приблизно наступного будови:
В
На вільні амінокислоти биуретовая реакція звичайно негативна. Виняток становлять гістидин, серин, треонін, аспарагін, які при великих концентраціях у розчині можуть утворювати забарвлений біуретового комплекс Cu2 +. p> Хід визначення. В одну пробірку вносять 5 крапель ратсвора яєчного білка, в іншу - гліцілгліціна і в третю - гліцину. p> Додають в кожну пробірку по дві краплі біуретового реактиву, злегка сбалтивают і спостерігають за появою фарбування.
б. Нінгідринова реакція на?-Аміногрупу. Метод заснований на взаємодії нингидрина з?-Аміногрупи амінокислот, пептидів, білків з утворенням забарвленого комплексу синього або синьо-фіолетового кольору. p> При нагріванні в присутності нингидрина відбувається окисне дезамінування?-аміногруп амінокислот і пептидів, а молекула нингидрина при цьому відновлюється:
В
Відновлений нингидрин реагує з аміаком і іншою молекулою окисленого нингидрина, в результаті утворюється забарвлене...
