ьому все більша кількість гідратованих неорганічних іонів (світло-сині кружечки) зв'язується з поверхнею білка і тим самим зменшується ступінь його агрегації (засолювання). При високій іонній силі молекули білків позбавляються Гидратирующие оболонок, що призводить до агрегації і випадання білка в осад (висолювання). Використовуючи розходження в розчинності, можна за допомогою звичайних солей, наприклад (NН4) 2SО4, розділити (Фракціоновані) суміш білків.
Діаліз
Для відділення низькомолекулярних домішок або заміни складу середовища використовують діаліз. Метод заснований на тому, що молекули білка через свої розміри не можуть проходити через напівпроникні мембрани, в той час як низькомолекулярні речовини рівномірно розподіляються між обсягом, обмеженим мембраною, і оточуючим розчином. Після багаторазової заміни зовнішнього розчину склад середовища в діалізному мішечку (концентрація солей, величина pH та ін.) Буде той же, що і в навколишньому розчині.
Гель-фільтрація
Гель-проникаюча хроматографія (гель-фільтрація) дозволяє розділяти білки за величиною і формою молекул. Поділ проводять в хроматографічних колонках, заповнених сферичними частинками набряклого гелю (розміром 10-500 мкм) з полімерних матеріалів. Частинки гелю проникні завдяки внутрішнім каналам, які характеризуються певним середнім діаметром. Суміш білків вносять в колонку з гелем і елюіруют буферним розчином. Білкові молекули, не здатні проникати в гранули гелю, будуть переміщатися з високою швидкістю. Середні і невеликі білки будуть в тій чи іншій мірі утримуватися гранулами гелю. На виході колонки елюат збирають у вигляді окремих фракцій. Обсяг виходу того чи іншого білка залежить в основному від його молекулярної маси.
Електрофорез
В даний час електрофорез в поліакриламідному гелі в присутності додецилсульфату натрію електрофорез є загальноприйнятим методом визначення гомогенності білкових препаратів. Метод заснований на властивості заряджених частинок (молекул) переміщатися під дією електричного поля. Зазвичай швидкість міграції залежить від трьох параметрів аналізованих білків: величини молекул, форми молекул і сумарного заряду. Тому попередньо білки денатурують з тим, щоб швидкість міграції залежала тільки від молекулярної маси. Для повної денатурації в середу додають Меркаптани, які розщеплюють дисульфідні містки.
Електрофорез проводять в тонкому шарі поліакриламіду. Після завершення електрофорезу, зони білків виявляють c допомогою барвника.
Список використаних джерел
Гуляєв В.Н. Цінне джерело білка//Піщ. Промисловість.- 2008. - №12.- С. 31-35.
Мак-Мюррей У. Обмін речовин у людини/Под ред. Н.Є. Бєляєвої.- М .: Світ, 2000. - 366 с.
Медников Б.М. Біоорганічна хімія/Медников Б.М.- М .: Росія, 2005. - 305с.
Мусіл Я. Основи біохімії патологічних процесів/Под ред. П.Н.Кізіріді.- M .: Медицина, 2005. - 430 с.
Наумов С.П. Білки та їх властивості/Наумов С.П.- М .: Академічний проект, 2005. - 298с.
Нестурх М.Ф. Методи хімії білків/Нестурх М.Ф.- М .: Вища школа, 2008. - 422с.
Огнев С.І. Амінокислоти, пептиди і білки/Огнев С.І.- М .: Вища школа, 2005. - 365с.
Парин В.В. Основи біохімії/Парин В.В., Космолінська В.В., Душков В.В.- М .: Просвещение, 2000. - 365с.
Рєзанов А.Г. Хімія білка/Рєзанов А.Г.- М .: Школа +2000, 2002. - 307с.
Робертіс Е. Будова і властивості білків/Робертіс Е., Новінський Ст, Саза Ф. - М .: Світ, 2003. - 305с.
Родман Л.С. Дослідження білків/Родман Л.С.- М .: Колос, 2001. - 340С.
Служинська З.А. Функції білків в організмі/Служинська З.А., Калинюк П.П.- Львів, 2002. - 278с.
