ез сито з отворами діаметром 5 мм, повітряно-сухої сировини (точна навіска) вічерпно екстрагувалі гексаном при періодічному струшуванні в перебігу 1 рік у темному місці.
Визначення вітаміну К1 в отриманий вітязі проводили методом ТШХ. Для цього на платівку «Silufol UF - 254» (Чехія), размером15? 15 см на відстані 1 см від краю пластинки наносили по 0,15 мл досліджуваного витягу и Розчин РОбочий стандартного бланках (РІС) вітаміну К1 у виде смуг довжина 1,5 см об'ємом 1 мл. Хроматографування проводили вісхіднім способом у сістемі розчінніків діетіловій ефір - бензол у співвідношенні 2: 8. За закінченні хроматографування пластинку віймалі, сушили на повітрі до відалення запаху розчінніків, переглядалось в УФ-Світлі при? =360 нм, відзначаючі зону Розташування вітаміну К1, Який флуоресціює на фіолетовому тлі у виде білої Пляма. Зону вітаміну К1, вірізалі и поміщалі в колбу з притертою пробкою, заливали 10 мл 96% спирту и елюювалі на протязі 30 хв при постійному струшуванні. Елюат фільтрувалі и Вивчай УФ-спектру.
Кількісній вміст вітаміну К1 в досліджуваному об'єкті визначавши за розроблення Ранее нами методикою вісокоефектівної рідінної хроматографії (ВЕРХ) з використанн калібровачного графіка, побудованого по Розчин РСО вітаміну К1.
Для цього 5,0 г (точна наважка) висушеності и подрібненого до 5 мм величини сировини екстрагувалі 50 мл гексанов. Колбу прієдналі до зворотнього холодильника и нагрівалі на кіплячій водяній бані течение 30 хв. После чего гексановий екстракт фільтрувалі через паперовий фільтр у мірну колбу ємністю 100 мл. Екстракцію повторювалі ще 2 рази по 25 мл гексанов нагріванням на протязі 10 хв. Об'єднаний гексановий екстракт упаривали до сухого Залишки на роторно-вакуумному віпарніку при температурі НЕ вищє 40С. Сухий Залишок, проміваючі метанолом, кількісно переносили в мірну колбу місткістю 10 мл. Отриманий розчин пропускали через фільтр «Мілліпор» з розміром пір 0,45 мкм.
хроматографування проводили в Наступний условиях: рідінній хроматограф фірми «Agilent Technologies +1100 series» з комп ютерного програмою «Chemstation» Версії А 09.03, ЗАБЕЗПЕЧЕННЯМ чотірьохканальнім насосом високого Масова, УФ/Вид-діод-матричних детектором, дегазатором рухомої фази, Автосамплер та термостатом колонки. Рухом фаза-метанол. Металева хроматографічна колонка розміром 140 * 4,6 мм, наповнена сорбентом Zorbax Eclipse XDB C - 8, з розміром частінок 5,0 мкм. ШВИДКІСТЬ потоку - 0,75 мл/хв. Довжина Хвилі детектування - 272 нм. Температура термостата колонки - 40С. Про єм, что вводитися в інжектор хроматографа проби, - 20мкм. Ідентифікація вітаміну К1 проводив путем зіставлення годині утрімування и спектра поглінання в УФ-області з его РСО фірми «Sagmeil»/
Побудова калібровачного графіка. Близько 0,033 РСО г (точна наважка) вітаміну К1 розчінялі в мірній колбі місткістю 25 мл и доводили об'єм Розчин до Мітки метанолом (вихідний А розчин). З Розчин А готувалі низьку робочих розчінів РСО в концентраціях від 0,00096 до 0,0800%. Отрімані розчини аналізувалі методикою ВЕРХ при Вищевказаними условиях, результати якіх представлені в Табліці 2. [14]
Таблиця 2
Розрахунок концентрації разчіна РСО віт К1, мкг/мл
№Концентрація Розчин РСО віт К1, мкг/млПлоща пікаКонцентрація/площаПараметрі калібрувального графіка1. 2. 3. 9,60 32,00 800,00209,14 673,78 16101,210,0459 0,0475 0,0497Коефіцієнт корреляції 1,0 Формула розрахунку y=mx + b, де, b=15,26632, m =20,10817, x - концентрація,%, y - площа
2. Вивчення флавоноїдів. Віділення флавоноїдів з трави Гірчак пташиного проводили помощью колонкової хроматографії.
Для цього надземну часть (1,5 кг) гірчака пташиного екстрагувалі 3 рази 70% етиловий спиртом. З об'єднаного вилучення відганялі спирт (вихід склавени 1,09%), Залишок розбавлялі водою и обробляємих послідовно екстракційнім бензилом, хлороформом, етилацетату и н-бутанолом. Перехід флавоноїдів у вітягання перевірялі методом ТШХ на пластинках «Silufol UF - 254» у сістемі розчінніків хлороформ-метанол у співвідношенні 4: 1. У результате Було Виявлено, что в етілацетатну фракцію переходити найбільша Кількість флавоноїдніх Сполука (13,1 г). Далі Цю фракцію хроматографувалі на колонці з сілікагелем. Колонку елюювалі сумішшю хлороформу и метанолу в різніх співвідношеннях (97: 3, 95: 5, 90:10, 85:15, 80:20).
З етілацетатной Фракції 105-112 С Було віділено 0,73 г Речовини «А», з Фракції 118-125 С - 0, 92 г Речовини «В», а з Фракції 129-135-0 , 72 г Речовини «С». Для ідентіфікації віділеніх Речовини були вівчені їх температури плавлення, УФ-, ІЧ-, ЯМР-спектру.
3. Вивчення полісахарідного складу. 50 г повітряно-сухої сировини рослини інактівуваті сумішшю хлороформ-метанол у співвідношенні ...
