дель біотехнологічних маніпуляцій
Кишкова паличка (лат. Escherichia coli , E. coli , по імені Теодора Ешерихії) -грамотрицательная паличкоподібна бактерія, широко зустрічається в нижній частині кишечника теплокровних організмів. E. coli - грам бактерія, факультативний анаероб, не утворює ендоспор. Клітини паличкоподібні, зі злегка закругленими кінцями, розміром 0,4-0,8 х 1-3 мкм, обсяг клітини становить близько 0,6 - 0,7? M?. Штами, що мають джгутики, здатні пересуватися. Джгутики розташовані перітріхально. Протопласт E. coli одягнений в муреіновий мішок, прилеглий до зовнішньої мембрані. E. coli відноситься до мікроорганізмів, що не володіє фізіологічної компетентністю до поглинання екзогенної ДНК.
Кишкова паличка може жити на різних субстратах. В анаеробних умовах E. coli утворює в якості продукту життєдіяльності лактат, сукцинат, етанол, ацетат і вуглекислий газ. Часто при цьому утворюється молекулярний водень, який заважає утворенню зазначених вище метаболітів, тому E. coli часто співіснує з мікроорганізмами, що споживають водень - наприклад, з метаногенами або бактеріями, що відновлюють сульфат.
Оптимальний зростання досягається культурами E. coli при температурі 37 ° C, деякі штами можуть ділитися при температурах до 49 ° C. Зростання може стимулюватися аеробним або анаеробним диханням, різними парами окислювачів і відновників, в тому числі, окисленням пірувату, формиата, водню, амінокислот, а також відновленням кисню, нітрату, диметилсульфоксиду і тріметіламін N-оксиду.
E. coli грає важливу роль в сучасній промислової мікробіології та біологічної інженерії. Робота Стенлі Нормана Коена і Герберта Бойєра на E. coli, з використанням плазмід і ендонуклеаз рестрикції для створення рекомбінантної ДНК, знаходиться біля витоків сучасної біотехнології. Удосконалення методів отримання сферопластов E. coli і їх трансфекції дозволили досягти досить високої ефективності трансформації молекулами ДНК різних фагів.
Кишкову паличку вважають універсальним організмом для синтезу чужорідних білків. У E. coli дослідники вводять гени за допомогою плазмід, що дозволяє здійснювати біосинтез білків для промислової ферментації. Також розроблені системи для синтезу в E. coli рекомбінантних білків. Одним з перших прикладів використання технології рекомбінантних ДНК є синтез аналога інсуліну людини. Модифіковані E. coli використовують при розробці вакцин, синтезу іммобілізованих ферментів і вирішення інших завдань. Однак, в організмі E. coli неможливо отримувати деякі великі білкові комплекси, що містять дисульфідні зв'язку, зокрема, білки, для прояву біологічної активності яких потрібно Посттрансляційна модифікація.
Чужорідні гени клонують в так званих човникових векторах. Ці вектора з однаковим успіхом реплицируются в клітинах декількох господарів, в даному випадку, в клітинах E. coli . Вектори були отримані комбінацією in vitro...
